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目的探讨维生素B12注射治疗在颞下颌关节紊乱病中的临床应用。方法对2006—2007年首都医科大学附属北京口腔医院颌面外科和北京丰台医院口腔科收治的145例颞下颌关节紊乱病患者,采用维生素B12注射治疗,观察其疗效。结果注射治疗后患者能立刻缓解症状,疼痛患者治疗有效率为92.8%,表现为关节绞锁和张口困难的治疗有效率为90.3%。随访观察1年复发率为10.3%。结论维生素B12关节区注射治疗能有效缓解关节区疼痛和张口受限,短期疗效稳定。     

Characterization of immunoglobulin G-degrading proteases of Prevotella intermedia and Prevotella nigrescens

Degradation of immunoglobulins is thought to be an important factor in the causation of periodontal diseases by hindering local host defenses and by providing nutrients to the periodontal microflora. In this study, we characterized the proteolytic activity against human immunoglobulin G (IgG) of 20 strains of Prevotella intermedia and Prevotella nigrescens isolated from periodontal pockets and oral abscesses. IgG degradation was studied by sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis. All strains degraded IgG within 48 h after growth in trypticase-yeast extract medium (TY) supplemented with 0.3% IgG. Incorporating IgG in TY broth enhanced bacterial growth. Protease profiles (zymography), which revealed the presence of 1-4 IgG-degrading proteolytic bands in bacterial cell extracts, became more complex after growth in the presence of IgG. A 38-kDa protease capable of degrading IgG nonspecifically was present in almost all strains. The proteolytic activity was mainly located on the surface of the cell envelope. Two strains of P. intermedia and P. nigrescens ATCC 33563 were selected for further studies. Bacterial cell suspensions in phosphate-buffered saline completely degraded human IgG, IgA and IgM within 24 h. This activity depended on reducing conditions and was inhibited at temperatures above 50°C. The pH optimum of immunoglobulin degradation was at pH 7. Strains cultured at 42°C showed a markedly reduced capacity to degrade IgG. Inhibition studies revealed that breakdown of IgG was caused by a cysteine protease(s). The capacity of P. intermedia and P. nigrescens to degrade immunoglobulins may explain their association with polymicrobial oral diseases.     

地塞米松和维生素B12干预下小鼠胚胎腭突Shh相关信号因子的研究

目的：　探讨地塞米松及其拮抗剂维生素B₁₂干预妊娠关键期孕鼠后,小鼠胚胎腭突上Shh信号通路重要因子、细胞周期调控因子及初级纤毛解聚相关因子的调控及三者间的变化关系。方法：　予特定孕期C57BL/6J孕鼠腹腔注射一定剂量的生理盐水（空白对照组）、地塞米松（地塞米松组）、维生素B₁₂（维生素B₁₂组）、地塞米松+维生素B₁₂（地塞米松+维生素B₁₂组）,观察妊娠17.5 d和13.5 d各组小鼠胚胎腭突融合情况;Western blot检测妊娠13.5 d各组小鼠胚胎腭突中Smo、Ptch1、Cyclin D1、Aurora A的表达变化并进行统计学分析。结果：　地塞米松延缓胚胎腭突发育而导致腭裂发生,而维生素B₁₂干预后,可部分恢复胚胎腭突发育。Western blot结果显示,与对照组相比,Ptch 1、Aurora A、Cyclin D1的表达在地塞米松组中明显降低（均P=0.000）,Smo无明显改变（P=0.695）;地塞米松+维生素B₁₂组中Ptch 1、Aurora A、Cyclin D1的表达与地塞米松组相比,均不同程度上调（均P=0.000）,Smo无明显改变（P=0.818）;维生素B₁₂组中各目的蛋白表达与对照组无统计学差异（P=0.879、0.399、0.645、0.168）。结论：　地塞米松影响小鼠胚胎腭突Shh下游信号传递和初级纤毛解聚,从而抑制Cyclin D1表达使小鼠胚胎腭突细胞增殖降低,维生素B₁₂可通过上调相关因子蛋白含量拮抗这一抑制效果。     

素特异性蛋白酶10在低氧性肺动脉高压中的表达及对USP10-AMPK信号通路的调控作用

目的 研究泛素特异性蛋白酶10（UPS10）在低氧性肺动脉高压（PAH）中表达的意义及对USP10-单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）信号通路的调控作用。方法40只大鼠随机分为4组,空载组与沉默组分别经气管滴入USP10-lentivirus、NC-lentivirus,对照组与模型组滴入等量生理盐水。3 d后除对照组外均建立低氧PAH模型。以PowerLab压力记录分析系统检测各组平均肺动脉压（MPAP）、右心室收缩压（RVSP）,计算肺血管管壁相对厚度指数（RTI）、右心肥大指数（RVHI）,对比各组MPAP、RVSP、RTI、RVHI。实时荧光定量PCR技术检测USP10、AMPK、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、内皮细胞型一氧化氮合成酶（eNOS）mRNA,比较各组USP10、AMPK、PI3K、Akt、eNOS mRNA相对表达量。蛋白质印迹法（Weston blot）检测USP10、AMPK、PI3K、Akt、eNOS蛋白及AMPK、PI3K、Akt、eNOS蛋白磷酸化表达情况,对比USP10蛋白相对表达量及p-AMPK/AMPK、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS蛋白比值。结果沉默组、模型组与空载组大鼠均出现精神状态变差,活动量减少,毛发暗淡,口唇、眼眶发紫,沉默组更为严重。肺动脉血管组织HE染色观察,沉默组、模型组与空载组管壁增厚、管腔变窄,伴有平滑肌和弹力纤维层增厚,沉默组变化更为明显。与对照组比较,其余3组的MPAP、RVSP、RTI、RVHI均增加（P<0.05）,沉默组均大于模型组与空载组（P<0.05）;与对照组比较,其余3组的USP10 mRNA、蛋白相对表达量及p-AMPK/AMPK、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS蛋白比值均下降（P<0.05）,沉默组均低于模型组与空载组（P<0.05）。结论USP10在低氧性PAH大鼠肺组织中表达低于正常肺组织,且其在肺组织中的表达下调刺激了PAH的发展,推测可能与抑制AMPK/PI3K/Akt/eNOS信号通路有关     

α-细辛醚、β-细辛醚改善Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤及机制

目的：探究α-细辛醚、β-细辛醚对β淀粉样蛋白活性片段Aβ_25-35诱导的PC12细胞损伤模型的保护作用及相关作用机制。方法：采用Aβ_25-35诱导PC12细胞建立Aβ毒性损伤细胞模型。将PC12细胞分为空白对照组、模型对照组、α-细辛醚组（0.5、1.0、1.5?μg/mL）、β-细辛醚组（6.3、12.5、25.0?μg/mL）、血管活性肠肽（VIP）组,并设VIP拮抗剂对照。采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验检测炎症因子白介素（IL）-1、IL-10、肿瘤坏死因子（TNF）-α,氧化因子诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、一氧化氮（NO）和凋亡因子caspase-3、p53水平;蛋白质印迹法检测细胞c-Jun氨基端激酶（JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）蛋白表达。结果：与模型对照组比较,α-细辛醚组、β-细辛醚组和VIP组细胞存活率增加,细胞凋亡率下降,凋亡因子caspase-3、p53和炎症因子IL-1、TNF-α水平下降,IL-10水平升高,氧化因子iNOS和NO水平下降,c-Jun氨基端激酶（JNK）、p38MAPK蛋白表达减少（均P<0.05）。VIP拮抗剂干预后,β-细辛醚组细胞存活率下降,细胞凋亡率增加,凋亡因子caspase-3、p53和炎症因子IL-1、TNF-α水平升高,IL-10水平下降,氧化因子iNOS和NO水平升高,JNK、p38MAPK蛋白表达增加（均P<0.05）;α-细辛醚组无显著变化（均P>0.05）。结论：α-细辛醚、β-细辛醚对Aβ_25-35诱导的PC12细胞损伤模型具有保护作用,β-细辛醚可通过促进VIP的分泌,调控JNK/MAPK通路从而抑制炎症因子、氧化因子水平,改善PC12细胞凋亡;α-细辛醚作用机制与VIP分泌水平无明显联系。     

血浆同型半胱氨酸和血清叶酸、维生素B12检测及其在糖尿病肾病中的临床意义

应用荧光偏振免疫分析法和时间分辨荧光免疫分析法分别测定血浆同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)和血清叶酸(FA)、维生素B12(VitB12)的水平,探讨其在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中的临床价值。选择137例糖尿病(DM)患者,并根据尿微量白蛋白(uMA)的排泄率及血肌酐(SCr)水平将其分为糖尿病无肾病组、DN初期组、临床DN组和氮质血症组,同时测定以40名健康人作对照组,检测其Hcy、FA和VitB12。采用SPSS10.0统计软件,进行直线回归相关分析。结果显示:四组DM患者血浆Hcy水平分别与对照组比较均显著性增高(P<0.05~0.01),并随DN患者肾脏损伤程度的加重而升高,每两组间相比有显著性差异(P<0.01)。四组DM患者血清FA、VitB12水平分别与对照组比较,除糖尿病无肾病组无显著性差异(P>0.05)外,其余三组均有显著性差异(P<0.01),每两组间比较均有显著性差异(P<0.01)并与血浆Hcy水平呈现负相关。结论:高Hcy血症是DM和DN患者的危险因素,血浆Hcy水平可作为DM和DN病情监测的有效指标,FA、VitB12的降低可能是诱发高Hcy血症的一个重要因素。     

血液中叶酸、维生素B12水平与冠状动脉病变的关系及其机理探讨

为探讨血液中叶酸、维生素B12(VB12)水平与冠状动脉病变的关系及其机理,测定了94例冠心病(CHD)患者的全血叶酸、血浆叶酸和VB12水平,与39名对照者进行对比,并对叶酸、VB12水平与发生病变的冠脉支数间的关系进行研究;随机抽取57例受试者进行血浆同型半胱氨酸(Hcy)与血脂测定,探讨叶酸、VB12水平与血浆Hcy和血脂的相关性。结果显示,CHD患者的全血叶酸、血浆叶酸和VB12水平均显著低于对照组(P<0.05),不同冠脉病变支数的患者叶酸和VB12水平无显著性差异,全血叶酸、血浆叶酸和VB12水平与Hcy呈负相关,与血脂水平无关,提示血液中较低的叶酸、VB12水平与CHD有关,叶酸与VB12水平降低导致的Hcy增高可能是CHD的一个独立的危险因素。     

小剂量左旋多巴上调pCREB及CD39蛋白表达发挥抗氧化应激损伤作用的研究

目的明确左旋多巴对PC12细胞生长及应激状态下存活的影响,探讨其抗氧化应激损伤的机制。方法不同浓度左旋多巴处理PC12细胞,用MTT法检测PC12细胞增长率及加入过氧化氢后细胞存活率;免疫荧光、Western blot方法测定磷酸化环单磷酸腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)及CD39蛋白表达。结果低浓度左旋多巴(20μmol·L-1)促进PC12细胞生长,且可抗氧化应激损伤,而蛋白激酶抑制剂减弱此保护作用。免疫荧光及Western blot结果显示CD39及pCREB表达升高。结论低浓度左旋多巴可通过上调CD39及pCREB表达发挥抗氧化应激神经保护作用。